臭氧氧化預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用

李糧輝  陳文華  李麗珍  陳燕凌  王蘭蘭

3.大鼠缺血再灌注模型建立：大鼠10%水合氯醛（3.5 ml/kg）腹腔注射麻醉，取仰臥位固定四肢和牙齒，備皮。用20G靜脈留置針充當氣管導管在大鼠氣管環甲膜處行環甲膜穿刺置套管外接小動物呼吸機，行機械通氣（通氣頻率為60次/分，吸呼比為（1:1）[13]。參考多項研究[14-17].建立70%肝臟缺血再灌注損傷模型。于中上腹部沿腹白線做一從劍突至腹部約3 -4 cm的縱行切口。鈍性分離腹膜、肝臟韌帶，找到肝臟左中葉以及門靜脈和下腔靜脈。輕柔支配肝左中葉的肝動脈、門靜脈和膽管的分支，并在分支的下方穿4-0線可逆性結扎。結扎后肝臟左中葉立即從紅色變為土黃色，說明肝臟結扎成功。將切口用濕潤的紗布覆蓋。缺血45 min后，松開結扎線。肝臟的顏色從土黃色變為暗紅色，表明肝臟再灌注成功。復灌注3 h。再灌注期間，將大鼠腹部皮膚、 肌肉進行單純縫合，關閉腹腔。

　　4.血清ALT、AST測定：復灌注3 h后開腹，用5 ml注射器抽取腹主動脈血樣約2 -3 ml/血樣裝入促凝管，室溫靜置30 min后，低溫高速離心機離心15 min。取上清液用全自動生化儀檢測血清ALT 和AST的活性。

　　5.組織SOD、MDA測定：大鼠采血后處死，取肝 中葉組織，置于液氮中速凍，-80℃冰箱中保存。制備10%肝組織勻漿，按照SOD活性和MDA檢測試 劑盒說明書進行操作，采用酶標儀測定SOD和 MDA的分光光度值，計算SOD活性和MDA含量。

　　未完待續......