以臭氧處理周圍閉塞性動脈疾病患者的自體

血液回輸可改善血液流變學參數和氧對組織的傳輸

R. Giunta A. Colppola C. Luongo A. Aammartino S. Guastafierro A, Grassia L. Giunta L. Mascolo A. Tirelli L. Coppola

對象和方法

對    象  27名患者(15名男性和12名女性,平均年齡是: 66±11歲)都有周圍動脈疾病(依照 Fontaine的劃分為第Ⅱ-Ⅲ階段:間歇性跛行, resling pain)的臨床證據, 一流的物理和非侵入性進度表確認了這些診斷。由20名匹配的健康志愿者組成了對照組。

本項研究最重要的排除標準是:(1)糖尿病,(2)貧血,(3)紅血球增多(癥),(4)血紅蛋白病,(5)慢性肺部疾病,(6)每天超過10支香煙的實際吸煙者。患者沒有接受過溶解血栓劑和抗凝血劑類藥物;在實驗前的7天內,不允許使用干擾血液流學變學參數的藥物。

臭氧化自體輸血和對照實驗

  在實驗的當天早上,經過一整夜的禁食后,將兩個特氟綸導管分別插入每名患者的兩只手臂的肘前靜脈中。一只導管立即插入,并通過慢慢地鹽水灌注以保持血液樣品的自由流動;而另一只導管在15分鐘后括入.作為自體輸血用一先前暴露在玻璃瓶中的02-03混合氣體中的100m1自體血液被慢慢地回輸,臭氧用(Mulitiossi-gen Medical93,Multi Tech,Milan,Italy)機器制備;所需數量(臭氧總量為3.6mg)的03用一只注射器抽取,然后加緊玻璃瓶中的血液中，和血液逐漸混合，10分鐘后，以5ml/min的回輸速率慢慢地回輸。

  血液未經臭氧處理之前和經過臭氧處理并回輸后30min，抽取靜脈血樣品，以確定兩種樣品的血液流變學參數（全血粘度、紅細胞變形性、纖維蛋白原和紅細胞壓積）以及血紅蛋白-氧親和力。

  對照試驗在另一天進行，每位患者的順序是隨機的，為了排除血液樣品的操作可能產生的影響，評定了非臭氧化自體輸血之前和之后的相同的參數。

 方  法  全血粘度是在37℃下，以兩種不同的剪切速率（225s-1和45s-1）在Wells-Brookfield micro-cone plate 數字黏度計中評價的（Moedl LVT 0.8°錐度，Brookfield Engineering Ladboratories Inc.，Stoughton，Mass.USA）。Cone and cup 的校準是用兩個Brookfield silicon fluid standard 頻率完成的。紅細胞變形性依照Ried等的方法，用過濾技術測量-20cm水柱的壓力下，血液通過其上有5um直徑圓柱形通道的核孔聚碳酸酯篩選過濾，其結果以1min內濾過的紅細胞體積來表示，并依照以下公式（來計算）：紅霞博速率（VRBC）（ml/min）=60*Ht/t，其中t表示過濾1ml血液所需的時間，而Ht代表的是紅細胞壓積的數值。血紅蛋白-氧親和力用p50標準值（p50std）來評定，這個數值被定義為：在50%氧飽和[oxygen saturation]、PH=7.4、溫度為37℃和PCO2=40±2mmHg的條件下，氧分壓（mmHg）的數值。它表示的是氧-血紅蛋白飽和曲線的位置，并且可由一下公式計算出來：

P50std=antilog[logP O2-logS O2/2.7-0.4*（7.4-pH）]

  2，3-DPG（氧卸載的重要調節器）和MDA(脂質過氧化物的指示劑)的血漿值由所有患者在臭氧化自體輸血之前和之后30min（的數值）來評價。2,3-DPG數值用包括α-診斷試劑在內的定量酶方法在無蛋白質上（層）清液（3ml 8%的三氯乙酸加1ml肝素化血液）中評定。而MDA水平則根據Warawdekar和Saslaw（的理論）用硫巴比妥酸反應物來測定。

統計學分析

所有的數據都是以平均值±標準偏差的的形式表示的。用初步的方差分析方法ANOVA評定（周圍動脈閉塞性患者和正常人群）組內和組間（的各項指標）在治療前和治療后的不同。當發現重要的P值時，通過成對的雙尾t-實驗來評定基線和臭氧治療后的不同。

結    果

  表1表示的是：課題研究的臨床和實驗室特性。在基線上，周圍動脈疾病患者的全血黏度、MDA和P50std數值明顯高于正常人群（p＜0.05-p＜0.001），而血液過濾性又明顯降低（P＜0.01）。臭氧化自體輸血治療的效果如表2所示，大自體輸血結束后30分鐘，兩種剪切速率和全血黏度顯著降低了（P＜0.01），血漿纖維蛋白原水平（P＜0.01）顯著下降，但紅細胞壓積卻沒有改變。血液過濾性、MDA血漿水平和P50std數值顯著升高（P＜0.05-P＜0.001）。而2,3-DPG數值沒有明顯的改變。

未完待續......