本文的研究目標就是想知道：靜脈臭氧療法對曾經(jīng)有過心臟病發(fā)作經(jīng)歷的患者的血清脂模式和抗氧化防御系統(tǒng)的活動性影響。

  材料和方法 本文以已征得同意的22名患者為研究對象，并且也得到醫(yī)學和外科研究中心的心血管科的人類學科委員會的批準。這22名患者均為男性，年齡從46歲到76歲不等。他們最近一次心肌梗死的經(jīng)歷發(fā)生在本研究之前的3個月到1年期之間。

  自體血回輸療法技術采用的是適量的臭氧/氧氣混合氣體。簡單的講是：將200ml血液引進輸血瓶中；然后，通過使臭氧/氧氣混合氣體（50mg∕L）起泡沫的方式處理這些自體血液；最后，將處理過的自體血以很快的流速回輸進患者體內(nèi)。這種治療的頻率是一周5次，共15次治療。

  離體實驗  為了弄清楚臭氧對血液組分的直接影響，首次接受臭氧治療的患者在開始時的全血（要在輸液瓶中用臭氧處理的）和生化參數(shù)要立即測量，在這次試驗中，用臭氧處理過的血液參數(shù)值要與處理前的相同患者的血液進行比較。

  活體實驗  接受0次、5次、15次臭氧治療后，測量患者血樣的生化參數(shù)。臭氧對生物體的影響是通過比較每位患者接受5次和15次臭氧治療時的不同參數(shù)值與接受0次時的數(shù)值進行比較分析（得到的）。

  參數(shù)確定 提取患者的血樣進入含有ACD（枸櫞酸、枸櫞酸鈉和葡萄糖的混合物）抗凝劑的試管中，我們要用完全相同的血樣進行測試。紅細胞中的還原型谷胱甘肽（GSH）和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G-6-PDH）用Beutler方法測量；紅細胞中的谷胱甘肽過氧化酶（GPx）活性采用Faraj等的修正方法-Thomson方法測量。

  從在1500xg條件下，離心分離20分鐘的血液中，取出一部分血漿一起進行分析。 血漿脂類過氧化物（LOP）根據(jù)Satoh方法測量；血漿膽固醇總量（CHO）、高密脂蛋白（HDL）和甘油三酯（TG）用來自Boe-hringer（Nos.290319,400371，726290，701912）的診斷用具包（diagnostic kits ）來化驗。

  統(tǒng)計分析 用wilcoxon Rang Sum test 進行統(tǒng)計分析，各參數(shù)值±SEM(即 ：平均值±標準平均誤差)來表示，當P值＜0.05時，認為（效果）是明顯的。

                表一  離體實驗中以臭氧處理血液之前和之后的血清脂模式     

      參  數(shù)       之  前         之  后           顯  著  性      

            CHO         5.50±0.37        5.29±0.39            0.2117

            LDL         3.65±0.44        3.54±0.42            0.5076

            HDL         0.98±0.09        1.01±0.11            1.0000

      TG         1.84±0.15         1.82±0.15            0.3105        

                                                    參數(shù)值用平均值±標準平均誤差來表示

  表 1 評價的是臭氧對血清脂模式的直接效果。用臭氧處理過的血液中的CHO、LDL、HDL和TG數(shù)值沒有立即產(chǎn)生明顯的變化，但有趣的是CHO和LDL的數(shù)值還稍稍有降低的趨勢。在相同的試驗中。

  表 2 顯示的是臭氧對谷胱甘肽氧化還原系統(tǒng)的血液生化參數(shù)的直接效果。在用臭氧處理過的血液中，LPO數(shù)值顯著升高了，紅血球GPx活性沒有顯著的變化，而紅血球的G-6-PDH的活性卻顯著升高了，紅血球GSH數(shù)值顯著降低了。這些意味著：紅細胞中的GPx并不是第一道抗氧化防線，并且這個任務可能是由谷胱甘肽-S-轉移酶來擔當?shù)模驗槲覀儼l(fā)現(xiàn)：GSH數(shù)值的迅速下降和G-6-PDH的升高引起的谷胱甘肽還原酶﹝NAD-PH﹞數(shù)值的增加。這些事實是：當臭氧與生物分子反應時，臭氧具有生物化學選擇性的另一證據(jù)。

   表 2  離體實驗中以臭氧處理血液之前和之后谷胱甘肽還原系統(tǒng)的血液生化參數(shù)的情況  

    參  數(shù)        之  前        之  后      顯  著  性        

          CPx         14.12±1.32       14.20±1.61       0.6009

   G-6-PDH        1363±100         1589±97        0.0176

  GSH          833±44          713±44        0.0074

    LPO         1.96±0.28        4.71±0.72        0.0003            

所有參數(shù)值均用±標準平均誤差的形式來表達  GPx和G-6-PDH的國際單位是g血紅蛋白,GSH umol/l紅血球；LPO是 umol/l血漿

  活體實驗 圖1 給出了臭氧治療過程中血清脂模式的行為。從圖上可看出：5次和15次治療后，CHO值比原始值顯著減小了，分別為5.5%和9.7%；相同情況下，LDL值也顯著降低了，分別降低了15.4%和19.8%，但在更高范圍內(nèi)，意味著：總膽固醇的降低主要是因為膽固醇負載【load】在LDL顆粒上（的原因）。隨著治療次數(shù)的增加，CHO和LDL減少得也更多。另一方面，HDL和TG含量卻沒有顯著地變化。

                圖1  5次和15次靜脈內(nèi)臭氧治療后，脂模式的百分數(shù)值

在以前的研究中，我們觀察到：和氧化防御系統(tǒng)有關聯(lián)的一些生物化學參數(shù)有了明顯的增加。在這篇文章中，我們觀察到：紅血球G-6-PDH活性在治療5次時，升高顯著，為22%；而在治療15次時，升高卻不明顯，為13.4%，如圖2所示。在臭氧治療期間，紅血球GPx活性升高，但不是統(tǒng)計上的顯著升高，而是大幅度的提高，治療5次和         15次后，分別升高41.8%和78.9%；使得這些增加成為生物學的顯著升高。另外，還觀察到：每名患者對這種酶的響應有很高的可變性。在用有機底物測量暴露在少量臭氧中的老鼠肺部GPx活性時，顯示其GPx活性明顯地增加了28%，GPx有異丙基苯氫過氧化物或特丁基氫過氧化物（有機過氧化物）作為底物測量總活性。然而，過氧化氫僅測量Se-依賴的GPx活性。在本研究中，如果總GPx活性已經(jīng)測定了，我們能夠僅測量Se-依賴的GPx活性也許就可以觀察到較高的統(tǒng)計學改變。

圖2 谷胱甘肽氧化還原系統(tǒng)生化參數(shù)的百分數(shù)值

在臭氧治療期間，紅細胞GSH和血漿LPO值有沒有明顯的變化，如圖2所示。這些和從離體實驗所得到的結果一起進行分析得到的結果，證明了：臭氧對血液膽固醇的影響是與臭氧捕獲劑酶的刺激關聯(lián)。另一方面，目前尚不清楚臭氧治療降低血液膽固醇的真實機理。然而，有關臭氧與有機分子反應及其產(chǎn)物方面的知識畢竟是增加了，這就允許我們考慮我們的實驗結果，交提出一個可能的作用機理。

  膽固醇的脂過氧化物的氧化導致了﹝B-ring oxidized oxysterols﹞的產(chǎn)生，他們可被有選擇的傳輸極低密度脂蛋白（VLDL）和低密度脂蛋白（LDL）顆粒上。這些oxysterols可通過肝臟有效地產(chǎn)生代謝變化，在膽汁中分泌【secreted】，并從屬于腸微生物區(qū)系的代謝，然后，以同樣是膽固醇的形式隨最終的糞便排泄物排出人體。

圖3 我們提出的關于臭氧對膽固醇代謝影響機理問題是:在臭氧治療的活體實驗中，oxysterols是如何產(chǎn)生的。我們可以假設：如圖3所示，當血液在輸液瓶中鼓泡（離體步驟）時，臭氧與來自血漿甘油三脂，磷脂和酯化膽固醇的不飽和脂肪酸反應，產(chǎn)生有機自由基和過氧化氫，當它們隨血液回輸體內(nèi)（活體步驟）時，造成膽固醇脂類過氧化物的生成。因為在室溫條件下，臭氧以非常快的速率進行反應，僅僅是輸液瓶中的血液與臭氧的反應物進入了生物體，正是這些反應產(chǎn)物刺激了抗氧化防御系統(tǒng)，并且，也可能有oxysterols分解代謝酶。因此，臭氧治療可恢復心血管患者捕獲劑酶活性的降低-這好像是這種疾病發(fā)病機制的臨界因素。主要的目標是給出合適的劑量、治療頻率，以取得適當刺激（機體）氧化防御系統(tǒng)和臭氧減少膽固醇活性（的效果）-正如本文所顯示的那樣。其他的機理也可能出現(xiàn)，但是，考慮到我們的實驗結果和文獻數(shù)據(jù)，我們認為：我們提出的機理是有更多可能的。

  關于增強過氧化物代謝活性對動脈粥樣硬化性疾病有有益的影響，還有更多其他的證據(jù)，所以，我們的結果也意味著：臭氧治療對抗氧化酶的刺激可能是過氧化物和膽固醇分解代謝兩者之間的一個重要連接。目前，我們正在研究這一理論。