臭氧氧化預處理對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用

李糧輝  陳文華  李麗珍  陳燕凌  王蘭蘭

討 論

　　肝臟缺血再灌注損傷是肝臟缺血后重新得到血供后發生的功能甚至結構損傷，是一種常見的臨床病理生理過程。肝臟缺血再灌注損傷常常發生于肝臟手術過程中，例如肝葉部分切除術、肝臟移植術等。由Asakawa等[17]提出的肝臟缺血再灌注模型建立方法：即通過分離、結扎支配大鼠肝臟左葉和中葉門靜脈、肝動脈以及膽道的分支，造成70%肝臟缺血再灌注損傷，但是卻可以避免脾臟出現淤血。 這一方法已廣泛用于許多動物實驗研究[18-19].

　　不同預處理可使器官產生應激反應，引起內源性的防御系統增強。研究表明缺血預處理可以提高許多器官（包括肝臟、腎臟、心臟、肺、腦）對缺血的耐受力，減輕器官的缺血再灌注損傷［20］（臭氧氧化預處理類似于其他預處理，如化學預處理、缺血預處理、熱預處理。所有這些預處理的相似點是反復、控制性的刺激能夠對長期、嚴重的應激損傷提供一定的保護作用［21］（研究表明臭氧預處理與缺血預處理同樣具有保護作用，而且臭氧預處理效果更好［19］（研究表明低濃度的臭氧可保護細胞免受后續臭氧暴露損傷。這種保護可能與多次臭氧暴露可誘導適應氧化應激或促進氧化預處理，增加和保存細胞抗氧化內源性物質有關[12,22-24].

　　本研究采用臭氧和氧氣的混合氣體腹腔注射治療。已有研究表明，臭氧預處理對臟器缺血再灌注損傷具有保護作用。以往研究[25-27]通常采用濃度為50 mg/L的臭氧經直腸給藥。然而經直腸給藥時臭氧難免漏出，劑量難以控制，影響實驗結果。大量的研究證據表明，急性和慢性吸入臭氧對呼吸道黏膜是有毒性的，尤其是對哮喘患者發生中毒風險更 大［28］O因為呼吸道內層是一個非常薄且含少量抗氧化劑的水膜，致使粘膜細胞極容易氧化［29］（研究 顯示長時間吸入臭氧可導致遞增性中毒，吸入50 m/L的臭氧數分鐘內即可導致大鼠死亡［30］o 為避免經呼吸道吸入臭氧，本研究采用腹腔注射給藥［31］（臭氧腹腔持續吹入治療不會破壞腹膜，臭氧迅速溶解并與滲出物反應，而氧氣則可被緩慢吸收無栓塞風險［30］（我們的前期預實驗顯示腹腔給藥所致療效指標比直腸給藥更加穩定。

　　ALT、AST是判斷肝細胞急性損傷程度的重要指標［32］（本研究肝臟缺血再灌注組大鼠血清ALT、 AST水平均較假手術組明顯升高（P＜0.05）。這表明缺血再灌注操作對大鼠肝臟造成了急性損傷。O3 +I/R組大鼠ALT、AST水平較I/R組有明顯降低（P<0.05）表明臭氧預處理可以減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷引起的肝細胞急性損傷。這一結果與Ajamieh[26-27]等的研究一致。

　　Ajamieh[26-27]認為一定控制量的臭氧可促進氧化預處理或適應氧化應激，從而防止活性氧誘發的損傷并防止肝臟缺血再灌注損傷。他認為臭氧防止肝臟缺血再灌注損傷的機制是通過提高內源性一氧化氮的濃度和維持細胞氧化還原平衡。Leon等的研究也表明臭氧治療能保護肝臟通過誘導酶或激活代謝途徑維持氧化還原平衡[25] .SOD是生物體內非常重要的抗氧化酶。它可以清除生物體內的氧自由基，對抗和阻斷氧自由基對細胞造成的損害。 MDA是氧自由基攻擊細胞膜脂質過氧化的終代謝產物，是最常測定的脂質過氧化產物。SOD和MDA 的高低可以充分反映機體或者組織的氧化應激狀態。Jiang等[33]算的研究表明，SOD可以使肝臟缺血再灌注損傷明顯減輕。我們的研究亦顯示，與單純缺血再灌注組比較，臭氧預處理可以明顯提高大鼠肝SOD活性、降低MDA含量（p<0.05）。這表明臭氧可通過提高SOD活性而抑制脂質過氧化反應，對大鼠肝臟缺血再灌注損傷起到預防保護作用。

　　綜上所述，臭氧預處理可減輕大鼠肝臟缺血再灌注損傷，其機制與抑制脂質過氧化反應有關。

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